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無內毒素快速質粒超大量提取試劑盒(Mega 10)
供應商 嘉興藍諾盛生物科技有限公司
最小起訂數 1
出口地區 全球
更多信息 
 
產品詳情 字體:
試劑盒組分:
 
Catalog  #
PD1624-01
Preps
2
DNA Unit
2
Filter Unit
2
Replacement Cup
4
Buffer A1
220 mL
Buffer B1
220 mL
Buffer N3
70 mL
Buffer KB
110 mL
Buffer RET
440 mL
RNase A (20 mg/mL)
22 mg(1.1 mL)
Endofree Elution Buffer
60 mL
User Manual
1
 
保存條件:
 
RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它組分室溫保存。
 
注意事項:
  1. 質粒拷貝數:純化中低拷貝的質粒時,使用2倍的菌液體積,2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇,相同體積的Wash Buffer (70% 乙醇)和Endofree Elution Buffer。
  2. 轉化菌: 若為-70℃甘油凍存的菌,請先涂布平板培養后,再重新挑選新的單個菌落進行培養。
  3. 切勿直接取凍存在4℃的菌進行培養。
  4. 杯結合能力:10 mg
操作簡明步驟:
  1. 取500 µL新鮮的菌液接種到 1,200-1,500 mL (勿超過 500 mL)的LB培養基(含適量抗生素),37oC震蕩培養14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘,收集菌體,并盡可能的吸去上清。
  2. 加入100 mL Buffer A1(確保已加入RNase A),用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。
  3. 加入 100 mL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻,然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。 
  4. 加入30 ml Buffer N3, 立即反轉幾次至出現絮狀白色沉淀。渦漩震蕩10 秒。充分混勻后,溶液將會變的  顏色均一,如果此時溶液顏色不均一,均局部顏色過深,建議將溶液輕甩幾次,以充分混合溶液,
  5. 將雙層Filter unit與500 mL或1000 mL的滅菌瓶(Corning# 430518 or  430282 or equivalent) 連接,旋緊,再將此裝置與真空負壓裝置連接。
  6. 先將步驟“5”中底部較澄清的裂解產物轉移至雙層Filter unit中,靜置5分鐘后打開真空裝置,使負壓由低到高,5分鐘后增至最大(0.04 Mpa)
  7. 當大部分裂解液已被過濾時,關掉真空負壓裝置,等候1分種,拆卸裝置,移去雙層Filter unit。
  8. 再將DNA unit杯與一個新的滅菌的500 mL或1000 mL的滅菌螺口標準瓶連接,旋緊。并將過濾嘴與真空負壓裝置連接。在步驟“7”中收集到的裂解液中加入1倍體積的Buffer RET (如220 mLBuffer RET加入220 mL的上清液中), 120 mL100%乙醇,立即混合均勻,立即將一半倒入DNA unit杯中,開啟負壓裝置,進行過濾吸附操作。
  9. 再將剩下一半倒入DNA unit杯中,當所有裂解液已過濾完,再維持真空1分鐘后,關掉負壓裝置。
  10. 向DNA Unit杯中加入50 mL Buffer KB,最大負壓(0.04Mpa)1分鐘,使液體完全通過DNA Unit 杯。
  11. 在DNA Unit杯中加入50 mL 70%乙醇,最大負壓(0.04Mpa)1分鐘,使乙醇完全通過DNA Unit杯。重復此操作步驟一次。
  12. 在DNA Unit杯中加入80 mL無水乙醇,最大負壓1分鐘,關掉負壓裝置,倒掉瓶子中的廢液,將DNA Unit杯重新連接至標準瓶上,開啟負壓裝置至最大負壓,真空抽20分鐘,以充分去除殘留的乙醇。
  13. 關掉負壓裝置,靜置一分鐘,移去標準瓶,將DNA Unit 連接至一個新的50 mL的離心管中,并旋緊。
  14. 加入20 mL Endofree Elution Buffer 到DNA Unit杯的膜上,室溫放置2分鐘,打開負壓裝置至最大(0.04 Mpa)洗脫DNA。此時會收集到10~12 mL洗脫液,這是1st 洗脫液。
  15. 關掉負壓裝置,將DNA Unit連接至一個新的50 mL的離心管中,加入5 mL Endofree Elution Buffer 到DNA Unit杯的膜上,室溫靜置2分鐘,開啟負壓裝置至最大(0.04 Mpa)洗脫DNA。此時會收集到約2~4 mL洗脫液,這是2nd洗脫液。

操作流程

        

 
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